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常用鉴定试剂的配制和应用
作者:多肽药动…    文章来源:www.yaodongxue.cn    点击数:    更新时间:2012-3-26          ★★★【字体:

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常用鉴定试剂的配制和应用

一、通用试剂

1、碘试剂

检查一般有机化合物。

(1)碘蒸气 预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内,使容器空间被碘蒸气饱和,将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时,于容器中加放一小杯水,增加容器内的湿度,可提高显色的灵敏度。

(2)0.5%碘的氯仿溶液 喷洒试剂,置空气中待过量的碘挥发后,喷1%淀粉溶液,斑点由棕色转为蓝色。

2、硫酸试剂

检查一般有机化合物。

5%硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后,置空气中干燥15min,100℃烤至斑点呈色(不同化合物呈不同颜色)。

3、重铬酸钾—硫酸试剂

检查一般有机化合物。

5g重铬酸钾溶于l00ml40%硫酸中。喷该试剂后,150℃加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜色)。

4、磷钼酸试剂

检查还原性成分。

5%磷钼酸乙醇溶液。喷洒后,120℃加热至呈蓝色斑点。

5、磷钨酸试剂

检查还原性成分

20%磷钨酸乙醇溶液。喷洒后,120℃烘烤,还原性物质呈蓝色斑点。

6、硝酸银—氢氧化铵试剂

检查还原性成分。

溶液i:0.1mol/l硝酸银溶液。溶液ⅱ:10%氢氧化铵溶液。临用前溶液i和ⅱ以

1︰5混合。喷洒后105℃加热5~l0min,至深黑色斑点出现。

7、中性高锰酸钾试剂

检查易还原性成分。

0.05%高锰酸钾溶液。喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。

8、碱性高锰酸钾试剂

检查还原性成分。

溶液i:1%高锰酸钾溶液。溶液ⅱ:5%碳酸钠溶液。溶液i和ⅱ等量混合使用,喷洒后,粉红背景上显黄色斑点。

9、四唑蓝试剂

检查还原性成分。

溶液i:0.5%四唑蓝甲醇溶液。溶液ⅱ:25%氢氧化钠溶液。临用前两液等量混合。喷洒后,微热或室温放置显紫色斑点。

10、荧光素—溴试剂

检查不饱和化合物。

溶液i:0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。溶液ⅱ:5g溴溶于l00ml四氯化碳中。先喷洒溶液i,然后将薄层板放入盛有溶液ⅱ的缸内,黄色斑点出现后,于紫外光灯下检视,红色底板上显黄色荧光斑点。

11.荧光显色试剂

检查一般有机化合物。

(1)0.2%2,7--'氯荧光素乙醇溶液。

(2)0.01%荧光素乙醇溶液。

(3)0.1%桑色素乙醇溶液。

(4)0.05%罗丹明b乙醇溶液。

喷洒任一溶液,不同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。

二、苷类鉴定试剂

1、糖鉴定试剂

(1) -萘酚-硫酸试剂

检查还原糖。

①溶液i:10% —萘酚乙醇溶液。溶液ⅱ:硫酸。取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液,加入溶液i 2~3滴,混匀,沿试管壁缓缓加入少量溶液ⅱ,二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。

②15% —萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上,100℃烤3~6min,多数糖显蓝色,鼠李糖显橙色,所显颜色于室温可稳定2天~3天。

(2)斐林试剂

检查还原糖。

溶液i:6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。溶液ⅱ:34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。取lml样品热水提取液,加入4~5滴用时配制的溶液ⅰ、ⅱ等量混合液,在沸水浴中加热数分钟,产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和甙,取lml样品水提液,加入lmll0%盐酸溶液,在沸水浴上加热l0min,过滤,再用10%氢氧化钠溶液调至中性,按上述方法检查还原糖。

(3)氨性硝酸银试剂

检查还原糖。

硝酸银1g,加水20ml溶解,小心滴加适量氨水,边加边搅拌,至开始产生的沉淀将近全部溶解为止,过滤。取lml样品的水溶液,加入lml试剂,混匀后,40℃微热数分钟,管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。本试剂也可作为色谱显色剂,喷洒后于110℃加热数分钟,显棕黑色斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。

(4)茴香醛-硫酸试剂

检查糖类化合物。

硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中,需临用前配制。喷洒于薄层板上,105℃加热至显示色斑,不同糖显不同颜色。

(5)苯胺-邻苯二甲酸试剂

检查糖类化合物。

苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后105℃烤5min,显红棕色斑点。

(6)l,3-二'羟基萘酚-磷酸试剂

检查酮糖、醛糖。

0.2%1,3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85%磷酸50ml混合均匀后使用。喷后105℃烤5min~10min,酮糖呈红色,醛糖显淡蓝色。

(7)苯胺-二苯胺-磷酸试剂

检查糖类化合物。

苯胺4ml、二苯胺4g及85%磷酸20ml溶于丙酮200ml中。喷洒于薄层板上,85℃加热10min,不同糖显不同颜色。

(8)2,3,5-三苯基氯化四氮唑(t.t.c)试剂

检查还原糖。

溶液ⅰ:4%t.t.c甲醇溶液。溶液ⅱ:4%氢氧化钠溶液。临用时将溶液ⅰ和ⅱ等体积混合。喷洒后,100℃加热5~10min,显红色斑点为阳性反应(醛类无干扰)。

(9)三氯化铁-冰醋酸(k.k)试剂

检查 -去氧糖,常用于强心甙。

溶液i:1%三氯化铁溶液0.5ml,加冰醋酸至l00ml。溶液ⅱ:硫酸。取样品乙醇提取液lml,置试管中,水浴上蒸去乙醇,残渣用0.5ml溶液i溶解,沿试管壁缓缓加入溶液ⅱlml,静置分层,上层渐显蓝色,下层显红色或棕色为阳性反应(其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。

(10)占吨氢醇试剂

检查 -去氧糖(常用于强心甙)。

10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中,再加入lml硫酸混合。取lml样品,加入试剂lml,置水浴上加热30min,显红色为阳性反应。

(11)gregg-gisvold试剂

检查2.6-去氧糖。

溶液i:10%三氯化铁溶液。溶液ⅱ:1%盐酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含2.8ml盐酸)。0.5ml溶液i与100ml溶液ⅱ混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上,晾干后,喷洒上述混合试剂,110℃加热5min,显蓝色为阳性反应。

(12)3,5-二氨基苯甲酸-磷酸试剂

检查2-去氧糖。

3,5-二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80%磷酸25ml,加水稀释至60ml。喷洒后,100℃加热15min,2-去氧糖在日光下显棕色,在紫外光下显黄绿色荧光。

(13)对硝基苯胺-过碘酸试剂

检查去氧糖。

溶液i:饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。溶液ⅱ:1%对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。先喷溶液i,放置10min,再喷溶液ⅱ,去氧糖显黄色,紫外光下显强荧光,再喷5%氢氧化钠甲醇溶液,颜色转绿,乙二醇同样显色。

2、酚类鉴定试剂

(1)三氯化铁试剂

检查酚类化合物、鞣质。

1~5%三氯化铁水溶液或乙醇溶液,加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液,加入试剂1~2滴,显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用,喷洒后,显绿或蓝色斑点为阳性反应。 ·

(2)4-氨基安替匹林-铁氰化钾(emerson)试剂

检查酚羟基对位无取代基的化合物。

溶液i:2%4-氨基安替匹林乙醇溶液。溶液ⅱ:8%铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用,先喷洒溶液i,再喷洒溶液ⅱ,用氨气熏,显橙红或深红色斑点为阳性反应。

(3)gibbs试剂

检查酚羟基对位无取代基的化合物。

溶液i:0.5%2,6-溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液ⅱ:1%氢氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液,滴加溶液ⅱ,使ph9~10,再加入1滴~2滴溶液i,显深蓝色为阳性反应。

(4)铁氰化钾-三氯化铁试剂

检查酚类、芳香胺类及还原性物质。

溶液i:1%铁氰化钾溶液。溶液ⅱ:2%三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点,再喷20%盐酸,能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。

(5)重氮化(pauly)试剂

检查酚羟基对位无取代基化合物。

溶液i:0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中,加水稀释至50ml。溶液ⅱ:5g亚硝酸钠溶于70ml水中。取1m1样品的乙醇溶液,加入1m13%碳酸钠溶液,在沸水浴中加热3min,再在冰水浴中冷却后,加入1~2滴溶液ⅰ与ⅱ的混合液(临用时,在冰水浴中等量混合),显红色为阳性反应。作色谱显色剂用,将溶液i与ⅱ各l0ml混合,再加20ml 1%碳酸钠溶液(均临用时在冰水浴中混合),喷洒后,显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。

(6)牢固蓝b盐试剂

检查酚类化合物。

溶液i:新配的0.5%牢固蓝b盐的溶液。溶液ⅱ:0.5%氢氧化钠溶液。先喷溶液i,再喷溶液ⅱ,呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。

3.黄酮类鉴定试剂

(1)盐酸-镁粉试剂

检查黄酮(醇)、二氢黄酮(醇)类化合物。

取lml样品的乙醇溶液,加入数毫克镁粉,滴加数滴盐酸,必要时水浴上微热,显红-紫色为阳性反应。

(2)shinoda试剂

采用含2%锌粉(w/w)-硅胶薄层板,展层后喷20%盐酸溶液,黄酮(醇)类呈红紫色。

(3)三氯化铝试剂

检查具有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物。

1%三氯化铝乙醇溶液或5%三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察,呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行。

(4)中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂

检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。

饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。取1ml样品的乙醇溶液,加1~2滴试剂,产生黄色沉淀。

(5)锆-柠檬酸试剂

检查具3-羟基或5-羟基的黄酮类化合物。

溶液i:2%二氯氧锆甲醇溶液。溶液ⅱ:2%柠檬酸甲醇溶液。取1mg样品,用甲醇溶解,加入溶液i lml,呈鲜黄色示有3-羟基或5-羟基;再加入溶液ⅱ1m1,黄色不褪,示有3-羟基;黄色褪去,加水稀释后变为无色,示无3-羟基,但有5-羟基。也可在滤纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿色,并具荧光。

(6)氨性氯化锶试剂

检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。

溶液i:1%氯化锶甲醇溶液。溶液ⅱ:氨蒸气饱和的甲醇溶液。取1mg样品的甲醇溶液,加入3滴溶液i,再加3滴溶液ⅱ,产生绿-棕-黑色沉淀为阳性反应。

(7)醋酸镁试剂

检查黄酮类、二氢黄酮类化合物,及羟基蒽醌类衍生物。

1%醋酸镁甲醇溶液。在滤纸或薄层板上,点1滴样品醇溶液,挥去醇后,点l滴试剂于样品斑点边缘,加热干燥,于紫外灯下观察,黄酮类显黄色荧光,二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌,显紫色为茜草型蒽醌。

(8)硼氢化钾试剂

检查二氢黄酮类化合物。

2%四氢硼钾的甲醇溶液。取样品1~2mg溶于甲醇中,加等量试剂lml后,加数滴盐酸,呈红-紫红色为阳性反应。薄层色谱上喷试剂,5min后放人盐酸蒸气槽内呈色。

4.醌类化合物鉴定试剂

(1)borntrager试剂

检查羟基蒽醌衍生物。

2%氢氧化钠或2%碳酸钠溶液(或甲醇溶液)。取lml样品的乙醇溶液,加lml试剂,呈红色为阳性反应。在薄层色谱上喷洒试剂,显橙黄或红色斑点。黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。

(2)菲格尔(feigl)试剂

检查醌类衍生物。

溶液i:25%碳酸钠溶液。溶液ⅱ:4%甲醛的苯溶液。溶液ⅲ:5%邻二硝基苯的苯溶液,取1滴样品的苯溶液,加入上述3种试液各1滴,混匀,置水浴上加热l~4min,呈显著的紫色为阳性反应。

(3)硼氢化钠-二甲基甲酰胺试剂

检查蒽醌及其衍生物。

20g硼氢化钠溶于100ml二甲基甲酰胺中。作色谱显色剂用。喷洒试剂后,于紫外光灯下观察,显强的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应。

(4)硼酸试剂

检查羟基蒽醌类化合物。

1%硼酸溶液。作色谱显色剂用,喷洒后,置紫外光灯下观察,呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。

(5)对亚硝基二甲基苯胺试剂

检查蒽酮类衍生物。

0.1%对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。取1m1样品的乙醇溶液,置水浴上蒸干,残渣用吡啶溶解,再滴试剂数滴,显紫色或绿色为阳性反应。

(6)活性次甲基试剂

检查苯醌及萘醌类衍生物。

lg活性次甲基试剂(例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等)溶于30ml氨与乙醇的等体积混合溶液中。取5ml样品的乙醇溶液,加入3ml试剂,显蓝、紫或红色为阳性反应,萘醌分子中具羟基,可使反应减慢或不起反应。

5.内酯、香豆素类鉴定试剂

(1)开环-闭环试剂

检查内酯环。

溶液i:1%氢氧化钠溶液。溶液ⅱ:2%盐酸溶液。取lml样品的乙醇溶液,加2ml溶液i,置沸水浴上加热3~4min,溶液比未加热时澄清。再加溶液ⅱ酸化(ph2),放置,溶液又变为混浊。酚性化合物和有机酸有干扰,但可用下法予以区别,取样品乙醇溶液数毫升,置水浴上蒸干溶剂,用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗内,用5%氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分,乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测。

(2)异羟肟酸铁试剂

检查内酯环。

溶液i:7%盐酸羟胺甲醇溶液(新鲜配制)。溶液ⅱ:10%氢氧化钾甲醇溶液。溶液ⅲ:1%三氯化铁甲醇溶液。取1m1样品的甲醇溶液,加入溶液i、ⅱ各5滴,置沸水浴上加热3min~4min,冷却后,用稀盐酸调至ph3~4,再加入溶液ⅲ1滴~2滴,显橙红或紫红色为阳性反应。作色谱显色用,将溶液i,ⅱ等量混合,喷洒后空气中干燥10min,再喷溶于1%盐酸中的三氯化铁溶液,显橙红或紫红色斑点。

(3)稀氢氧化钠溶液 将检样点于滤纸片或薄层上,试样边缘点上碱液,晾干,置紫外灯光下观察,多数羟基香豆素有强的荧光。

配合酚类鉴定试剂的检查,以确定游离酚羟基的存在及取代位置。

6,强心甙鉴定试剂

(1)碱性3,5-二硝基苯甲酸(kedde)试剂

检查强心甙的 、 -不饱和内酯环。

2%3,5-二硝基苯甲酸甲醇溶液与5%氢氧化钾溶液,用前按1︰l混合。取1m1样品的甲醇溶液,加入3~4滴试剂,显紫红色为阳性反应,几分钟后褪色。也适用于薄层色谱。

(2)碱性苦味酸(baljet)试剂

检查强心甙的 、 -不饱和内酯环。

9ml 1%苦味酸乙醇溶液与1ml l0%氢氧化钠溶液用前配制混合。用1m1样品的乙醇溶液,加入1滴试剂,放置15min左右,显橙红色或红色为阳性反应。

(3)碱性亚硝酰铁氰化钠(legal)试剂

检查不饱和内酯、甲基酮或活性亚甲基(常用于强心甙)。

溶液i:0.5%亚硝酰铁氰化钠乙醇溶液。溶液ⅱ:10%氢氧化钠溶液。取1 m1样品的甲醇溶液,置水浴上蒸干,冷却后加lml吡啶溶解残渣,加入4~5滴溶液i和1~2滴溶液ⅱ,溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。用于薄层色谱检查,将1g亚硝酰铁氰化钠溶于10%氢氧化钠-乙醇(1︰1)的溶液中,喷洒后,显红色或紫色斑点。

(4)磷酸-溴试剂

检查强心甙。

溶液i:10%磷酸乙醇溶液。溶液ⅱ:溴化钾饱和溶液-溴酸钾饱和溶液-25%盐酸溶液(1﹕l﹕1)。用于薄层色谱检查,取溶液i喷洒后,125℃加热12min,紫外光灯下观察。再将薄层板烤热,趁热喷溶液ⅱ,不同的强心苷显示不同的颜色斑点。

(5)醋苷-硫酸(liebermann-burchard)试剂

检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。

取0.1~0.2mg样品,置于白瓷反应板上,加入0.3ml醋酐,使样品溶解,沿边缘滴入硫酸,出现红-紫-蓝-绿色,最后褪色为甾体皂甙,三萜皂甙只能呈黄-红-紫等。

(6)三氯醋酸—氯胺t试剂

检查洋地黄毒甙元衍生物和2,6-去氧糖苷。

25%三氯醋酸乙醇(氯仿)溶液4ml与3%氯胺t溶液1ml混匀。喷洒后,100℃加热数分钟,于紫外光灯下观察。洋地黄毒甙元的苷类显黄色荧光,羟基洋地黄毒苷元的甙类显亮蓝色荧光,异羟基洋地黄毒苷元的苷类呈灰蓝色荧光。洋地黄毒糖的苷(2,6-去氧糖苷)在可见光下呈暗蓝色。

强心苷的鉴定应由苷元(甾体母核和不饱和五元内酯)和2-去氧糖两部分共同证实。

7、甾体、三萜及其苷的鉴定试剂

(1)三氯化锑试剂

检查甾体、萜类、皂苷。

25g三氯化锑溶于75ml氯仿中。喷后100℃加热5min,不同的皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。

(2)三氯醋酸试剂

检查皂甙。

3.3g三氯醋酸溶于10ml氯仿,再加入1~2滴30%过氧化氢溶液。将样品的氯仿溶液滴在滤纸上,加试剂l滴,加热至60℃,生成红色-紫色为甾体皂甙;加热到100℃始见显色为三萜皂甙o

(3)硫酸:甲醇(1︰1)试剂 喷后加热,不同皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色。所显颜色与温度无关。

(4)氯磺酸:乙酸(1︰1)试剂 喷后130℃加热5min,各种皂苷元可显天蓝色、

紫色、粉红色、淡棕色等,在紫外光灯下也显不同的荧光。

(5)香草醛-硫酸试剂

检查高级醇类、酚类、甾体、萜类、芳香油。

1g香草醛溶于100ml硫酸中,或0.5g香草醛溶于100ml硫酸-乙醇(4﹕1)中。喷洒后,室温、120℃加热观察,显示红、蓝、紫等各种颜色斑点。

8.氰苷鉴定试剂

(1)苦味酸试纸 取适当大小的滤纸,浸入苦味酸饱和溶液中,浸透后取出,晾干。再浸入10%碳酸钠溶液内,迅速取出,晾干即得。取样品粉末0.5g置试管中,加水混合均匀,加入稀硫酸数滴。在试管口夹放一条苦味酸试纸(试纸不能接触到药液),塞紧。将试管在沸水浴中加热数分钟,试纸变成红色,表明含氰苷。

(2)普鲁士蓝试验

溶液i:10%硫酸亚铁溶液(用前配制)。溶液ⅱ:5%三氯化铁溶液。取样品粉末0.5g置试管中,加水湿润,立即用经10%氢氧化钾溶液湿润的滤纸将试管口包紧,于热水浴上加热10min后,在滤纸上加溶液i、稀盐酸和溶液ⅱ各1滴,滤纸显蓝色为阳性。

三、挥发油鉴定试剂

1、茴香醛-硫酸试剂

硫酸1m1加至50ml冰醋酸中,冷却后加入茴香醛0.5ml(必须临用时配制)。喷洒后,105℃加热,挥发油中各成分显不同颜色。

2、碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂

检查过氧化物。

溶液i:4%碘化钾溶液10ml与冰醋酸40ml混和,再加锌粉一小勺过滤。溶液ⅱ:新制的1%淀粉溶液。先喷溶液i,5min后大量喷溶液ⅱ,直至薄层透明为止。显蓝色斑点为过氧化物。

3、2,4-二硝基苯肼试剂

lg 2,4-二硝基苯肼、36%盐酸l0ml溶于1000ml乙醇中。喷洒后,显黄红色斑点为阳性反应。

4、硝酸铈试剂

检查醇类化合物。

硝酸铈6g溶于2.5%100 ml硝酸溶液中,喷洒后,黄色背景上显棕色斑点为阳性反应。

5、钒酸铵(钠)-8-羟基喹啉试剂

检查醇类化合物

1%钒酸铵(钠)溶液1ml和8-羟基喹啉的6%乙醇溶液1ml混和,用30ml苯萃取,分取灰蓝色的苯溶液为试剂。喷洒后,微加热,灰蓝色背景上显淡红色斑点为阳性反应。

挥发油组成复杂,需依据结构特征如醇、醛、酮、酚、醚、酯、内酯等选择鉴定试剂。

四、生物碱鉴定试剂

1、改良碘化铋钾试剂

为生物碱通用显色剂。

溶液i:0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸,加水40ml。溶液ⅱ:8g碘化钾溶于20ml水中。溶液i和溶液ⅱ等量混和,于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配置:7.3g碘化铋钾、10ml冰醋酸加水60ml。取lml样品的稀酸溶液,加1滴~2滴试剂,产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。作为薄层色谱显色剂,取混和液1ml、醋酸2ml、水10ml混和即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应。

2、碘化汞钾

为生物碱通用沉淀试剂。

1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20 ml水中,将氯化汞溶液慢慢加入碘化钾溶液,混合后,加水至100ml。取lml样品的稀酸溶液,加1~2滴试剂,产生类白色沉淀为阳性反应。

3、硅钨酸试剂

为生物碱通用沉淀试剂。

1g硅钨酸溶于20 ml水中,加10%盐酸使成ph2左右。取1 ml样品的稀酸溶液,加入1~2滴试剂,产生白色至褐色沉淀为阳性反应。

4、碘化铂钾(碘铂酸)试剂

为生物碱通用沉淀试剂。

10%六氯铂酸3ml和97ml水混合,加6%碘化钾溶液100ml,混合均匀(临用前配制)。取1 ml样品稀酸溶液,加l~2滴试剂,不同生物碱显不同颜色沉淀。

5、碘—碘化钾试剂

为生物碱沉淀剂。

1g碘及10g碘化钾溶于50ml水中,加2ml醋酸,再用水稀释至100ml。取1 ml样品稀酸溶液,加入试剂1~2滴,产生棕色或褐色沉淀为正反应。

6、苦味酸试剂

为生物碱通用沉淀试剂。

苦味酸1g溶于100ml水中。取1 ml样品中性溶液,加入试剂1~2滴,产生黄色晶形沉淀。

7、鞣酸试剂

为生物碱通用沉淀试剂。

鞣酸1g用1ml乙醇溶解后,加水至10 ml 。取lml样品稀酸溶液,加入试剂1~2滴产生白色至棕黄色沉淀。

8、硫酸铈—硫酸试剂

检查生物碱及含碘化合物。

0.1g硫酸铈悬浮于4ml水中,加三氯醋酸1g,加热至沸,放冷,逐滴加入硫酸直到浑浊消失为止。喷洒试剂后,110℃加热数分钟,呈色(不同生物碱显不同的颜色)。

9、钒酸钠—硫酸试剂

检查生物碱。

1g钒酸钠溶于100ml硫酸中。喷洒试剂后,不同生物碱产生不同颜色,如莨菪碱显红色,马钱子碱显血红色,士的宁显蓝紫色,奎宁显淡橙色,吗啡显棕色等。

10、雷氏铵盐试剂

检查水溶性生物碱。

2%硫氰化铬铵溶液(临用时配制)。取1ml样品的弱酸性水溶液(ph5~6),加入1~2滴试剂,产生暗红色沉淀为阳性反应。

11、ehrlich试剂

检查吡咯、吲哚类生物碱。

1g对二甲氨基苯甲醛溶于25ml 36%盐酸和75ml甲醇混合溶液中。取1ml样品的稀酸溶液,加人数滴试剂,加热,显紫红或青紫色为阳性反应。

五、鞣质类鉴定试剂

1、氯化钠—明胶试剂

检查鞣质。

1g明胶溶于50ml水中(60℃水浴中加热),加入10g氯化钠,使完全溶解后,用水稀释到100ml。取1m1样品的60℃水浸液,加入1~2滴试剂,产生白色浑浊或沉淀

2、对甲苯磺酸试剂。

检查鞣质、甾体、黄酮类。

20%对甲苯磺酸氯仿溶液。薄层色谱上喷洒试剂后,100℃加热5min显出不同颜色的斑点。

3、新鲜石灰水试剂

检查鞣质。

取1ml样品的热水提取溶液,加新鲜石灰水上清溶液数滴,产生青灰色沉淀为可水解鞣质,产生棕或棕红色沉淀为缩合鞣质。

六、氨基酸、多肽、蛋白质鉴定试剂

1、茚三酮试剂

检查2-氨基酸及含有2-氨基酸的肽类、氨基糖和蛋白质。

0.2g茚三酮溶于l00ml正丁醇中,加冰醋酸3ml。或者,0.2g茚三酮溶于l00ml乙醇或丙酮中。取1ml样品的冷水浸液,加入2~3滴试剂,沸水浴上加热5min放冷,显蓝色或蓝紫色。

2、吲哚醌试剂

检查氨基酸、多肽。

吲哚醌1g溶于100ml丙酮中,加入10ml醋酸。作薄层色谱显色剂,喷洒试剂后,100~110℃加热l0min,显蓝、红、桃红或棕色斑点。

3、1,2-萘醌-4-磺酸钠试剂

检查氨基酸。

0.02g l,2-萘醌-4-磺酸钠溶于l00ml5%碳酸钠溶液中,新鲜配制。喷洒试剂后,室温晾干,不同氨基酸出现不同的颜色。

4、双缩脲试剂

检查多肽、蛋白质。

七、有机酸鉴定试剂

1、溴酚蓝试剂

检查有机酸。

0.1%溴酚蓝的乙醇溶液。作薄层色谱显色剂,喷洒后,蓝色背景上呈黄色斑点。如不明显,可再喷氨水,然后暴露在盐酸气体中,则为黄色背景上呈蓝色斑点。

2、芳香胺—还原糖试剂

检查有机酸。

5g苯胺和5g木糖溶于100ml 50%乙醇中。作薄层色谱显色剂,喷洒试剂后,

125~130℃加热至出现棕色斑点。

3、吖啶试剂

检查有机酸。

0.005%的吖啶乙醇溶液。喷洒试剂后,于紫外光灯下观察,显黄色荧光


 

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